一：方法開發前準備

1、確認儀器狀態正常，如有必要，更換洗針液、廢液，清洗進樣針；更換進樣襯管、隔墊，清洗噴嘴等；

2、確保要使用的色譜柱狀態正常，色譜柱柱頭潔凈，必要時可切去1-2cm，柱效正常；

3、了解要檢測的項目，中控，純度，溶殘等；

4、了解樣品性狀，溶解度、穩定性等；例如遇水、遇醇是否穩定——如易水解、易發生酯交換，避免用水、甲醇、乙醇作稀釋劑，首選乙腈作稀釋劑；遇酸、遇堿是否穩定，例如Boc結構不耐酸，應換全新的襯管；高溫是否穩定等；

5、根據化合物的化學結構及理化性質初步判斷使用的檢測手段；當化合物有紫外吸收時首先考慮使用液相色譜法進行檢測，當化合物沒有紫外吸收，含有一定的碳氫且熱穩定性好時，優先考慮使用氣相色譜法；當檢測物質的限度很低（幾十ppm）時可使用LC-MS進行檢測；常見的適合做氣相的化合物如下：分子量150以下，沸點350℃以下（大于400℃不能使用氣相），具有四元環，五元環，六元環結構和部分橋環螺環結構；當化合物是鹽時需要進行游離后進樣；當化合物含一個或多個羧基時，沸點會提高很多，不一定適用于氣相檢測；當化合物同時含有氨基及羧基時（氨基酸），一般有很高的沸點，不能采用氣相檢測。

二：方法開發思路

1、當化合物不是特殊的大極性時，首先用HP-5、DB-624的通用方法（12min或20min，盡量選用運行時間長一點，讓所有物質都出峰完全）作初步篩選，觀察峰高、峰形及分離度；

2、當峰高太低時，可以通過改變進樣量或提高樣品濃度來增大峰高（1000-6000），氣相的樣品濃度一般大于20mg/mL；或者適當調整分流比來提高響應值（分流比越大，越容易造成分流歧視）；

3、當峰形不好時，可以適當提高柱流量，提高分流比，提高尾吹氣流量來使峰形變得窄而尖銳；當峰形前延或拖尾時，可以更換極性更大一點的色譜柱；對于早流出組分拖尾嚴重的情況，先確保色譜柱安裝沒有漏氣，然后可以降低進樣口溫度50°C或調整程序升溫初始溫度低于溶劑沸點10~25°C（升溫梯度變緩）；

4、當峰形好，但分離度不夠，兩峰沒有分開時，可以調整柱溫，降低流速，調整程序升溫梯度緩慢一點等；

5、當峰高、峰形及分離度都合格時，要考察方法的耐用性；改變進樣口的溫度，看低溫下有無物質殘留，高溫下有無物質分解；調整流速，看對出峰保留時間影響大不大，若影響太大可能會導致分離度減??；最后做LOQ，溶液穩定性等確認方法。

【轉自研發分析之路】